期刊简介
本杂志是全国唯一医院感染管理与控制的专业学术期刊。办刊宗旨在于加强医院感染控制，提高全国医院感染管理水平，在全国医院感染管理、消毒灭菌、抗菌药物使用等工作中起导向作用，在业界公认有以下两个特点：一是高学术水平，注重内容的科学性和创新性；二是普及性，指导医院感染管理、监控，提高全国医院感染监控的整体水平。
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首页>中华医院感染学杂志
- 杂志名称：中华医院感染学杂志
- 主管单位：中国人民解放军总医院
- 主办单位：中华预防医学会 中国人民解放军总医院
- 国际刊号：82-747
- 国内刊号：1005-4529
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国精品科技期刊期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), 国家图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 剑桥科学文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美)
产气荚膜梭菌α毒素基因片段克隆的测序与应用
刘颖；王健；张会英；赵艳；王艳
关键词：产气荚膜梭菌A型, α毒素, 克隆, 测序, 实时定量聚合酶链反应
摘要：目的：为了获得A型产气荚膜梭菌C57株α毒素基因片段克隆质粒，作为实时定量PCR检测标本产气荚膜梭菌标准，以备临床应用。方法采用两轮高保真 PCR扩增 A 型产气荚膜梭菌 C57株α毒素基因片段（Cpa900），经EcoRⅠ酶切后插入质粒pUC19并连接，构建重组质粒pUC19-Cpa900，转化大肠埃希菌Top10感受态菌株并予以增菌后测序，并提取质粒进行实时定量PCR测试。结果 pUC19下游引物匹配Cpa900上、下游引物双PCR筛选电泳结果表明，116-2株中含单拷贝、反向插入pUC19的Cpa900，并为测序结果所证实；测序结果表明，克隆片段与美国典型菌种保藏中心标准株ATCC 13124的全基因序列CP000246．1中的磷脂酶C（PLC）基因（CPF_0042）相应序列相比，符合率高达99．8％；变异位点不在两实时定量PCR引物和探针区，经实时定量PCR实测对扩增效率无影响，完全可用作实时定量PCR检测标准。结论 A型产气荚膜梭菌α毒素克隆片段序列高度保守，作为模板具有高扩增效率，可作为标准品用于实时定量PCR检测 A型产气荚膜梭菌，质粒引物匹配插入片段双引物双PCR筛选转化菌株，不但可鉴定阳性克隆，还能确定重组质粒中插入基因拷贝数量和插入方向、有效避免假阳性，不失为很好的筛选方法。
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